گل همیشه‌بهار (pot marigold ) با نام علمی Calendula officinalis L. از خانواده Asteraceae می باشد. این گیاه بومی جنوب اروپا بوده و در نواحی با آب و هوای گرم در دنیا کشت می‌شود. همیشه‌بهار به عنوان یک گیاه علفی زینتی دارای کاربرد‌های متعدد دارویی، تغذیه‌ای و آرایشی است. از آنجا که تولید و پرورش گیاهان زینتی یکی از بخش‌های در حال رشد تجاری در ایران و جهان محسوب می‌شود، لذا شناسایی فیتوپلاسماهای آلوده‌کننده این گیاهان از جمله گل همیشه‌بهار حائز اهمیت می‌باشد. در بازدید‌های انجام شده در سال 1394 از فضای سبزو گلخانه‌های گل‌های زینتی استان خراسان رضوی، علایمی نظیر ریز‌برگی، زردی، برگی شدن اجزای گل، رشد جوانه‌های جانبی ساقه، سبز شدن گلبرگ‌ها، رشد جوانه‌های داخل گل و عقیمی، جارویی شدن و توقف رشد در برخی از بوته-های گل همیشه‌بهار مشاهده شد. برای ردیابی فیتوپلاسما در گل‌های همیشه بهار از آزمون PCR استفاده شد. از رگبرگ‌های میانی پنج گیاه دارای علایم و دو گیاه بدون علایم دی‌ان‌ای کل با استفاده از CTAB به روش ژانگ و همکاران (1998) استخراج واز نظر آلودگی به فیتوپلاسما در واکنش زنجیره‌ای پلی مراز با استفاده از آغازگرهای عمومی P1/P7(دور اول) وآغازگرهای آشیانه‌ای R16F2n/R16R2 (دور دوم) بررسی شدند. همچنین برای تایید نتایج، تکثیر ژنsecA با استفاده از جفت آغازگرsecAfor1/secArew3 انجام شد. محصولات تکثیری به صورت دوطرفه خوانش و توالی یابی شدند. آنالیز فیلوژنی ژن‌های توالی یابی شده به همراه دیگر توالی‌های فیتوپلاسمایی مشابه موجود در بانک ژن با استفاده از نرم‌افزار Mega5 و به روش پیوست همسایه‌ها انجام شد ودر نهایت چند‌شکلی طولی قطعات حاصل از هضم (RFLP)مجازی محصول PCR آشیانه‌ای انجام گرفت. در تمام نمونه های دارای علایم به ترتیب برای جفت آغازگرهای P1/P7، R16F2n/R16R2 و secAfor1/secArew3، قطعاتی به طول تقریبی 1800، 1250 و 840 جفت باز تکثیر شدند. تحت همین شرایط هیچ قطعه ای در نمونه های دی‌ان‌ای حاصل از گیاهان بدون علایم و کنترل منفی تکثیر نشد. جست و جو با برنامه بلاست با استفاده از این ترادف نشان داد که فیلودی همیشه‌بهار بیشترین شباهت را به میزان 98 درصد با فیتوپلاسمای افژولش شبدر (Clover proliferation group) از گروه آر ان ای ریبوزومی16Sr VI داشت. الگوی RFLP مجازی نیز با استفاده از iPhyClassifierنشان داد که فیلودی همیشه‌بهار در این استان متعلق به گروه 16Sr VIو زیرگروه A می‌باشد. پیشتر در ایران همراهی یک فیتوپلاسما از گروه 16SrII با فیلودی همیشه‌بهارگزارش شده است. این اولین گزارش از همراهی یک فیتوپلاسما از گروه 16SrVIبا فیلودی گل همیشه‌بهار از ایران می‌باشد.
